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　　摘要：药品是保障国民生命健康的最有力屏障，药品检测能有效保障药品安全。微生物快速检测技术成为顺应行业发展的需要。本文对新发展的快检技术现状进行分析，同时讨论了其在药品监管方面的应用意义，以期为药品微生物检测及监管提供新思路。

　　药品安全是国民关注自身健康的首要话题，微生物检查法是保障药品质量的有效措施，药品特别是无菌制剂的微生物检查是保证药品质量的必要手段[1]。《中华人民共和国药典》规定的微生物检查法虽成熟，但整个过程中人员操作居多，从准备到实验结束受主观因素影响较多，程序复杂，且判定时间较长，在一定程度上限制了监管部门及时发现有效解决相关问题的能力。在这种前提下，更加科学合理、快速先进的新检测技术和方法成为行业发展的需要，而飞速发展的微生物快速检测技术则能够适应现代化发展，以更高的检测效率、更精准的检测结果等特点切实保障药品质量安全，守护国民生命健康。

　　聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外将某段DNA片段放大扩增的分子生物学技术，利用高温条件将双链DNA变性为单链DNA，退火后引物与单链以碱基互补配对的方式相结合，经DNA聚合酶延伸并进行多个循环复制，最终达到可检测的范围。PCR技术快速、灵敏度高、特异性强，被应用于检测无菌制品中的细菌污染。但该方法也有一定的局限性，如PCR技术的灵敏度直接受细菌是否充分裂解的影响，核酸提取仪法细菌含量较低的情况下，阳性和阴性的结果判定区分度不足；同时，对样品中的细菌活性要求较高，若存在死菌会干扰试验结果；且试剂盒成本高，并不适用于常规检测。王晓冲等[2]利用PMA去除样品中死菌DNA干扰，将PCR方法应用于人工污染药品无菌快速检测，能够更加快速准确检测出样品中活菌的存在，可应用于药品无菌检查的快速筛查。

　　流式细胞技术（flow cytometer method，FCM）是采用流式细胞仪（flow cytometer，FC）对悬液中高速流动的单细胞或其他生物粒子进行快速定量分析和分选的一种生物学技术。该技术通过选用适当的荧光物质标记样品中微生物细胞，在特定波长光下激发荧光信号，可获取纯细胞群体。该检测方法速度快、精确度高、准确性好，是目前最先进的定量分析技术之一，目前该技术已广泛应用于各类液态产品及血液生物制品的微生物检测研究中。Stiefel等[3]研究发现采用FCM与常规试验法相比能有效缩短检出时间，使用特定染料物质SYTO9染色标定15 min加入金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的样品后，可在半分钟得到检测结果，当含菌量在10~104 cfu 之间时，其检出时间比常规方法缩短了40%~70%。

　　电阻抗技术是根据微生物在培养基中代谢活动的不同产生相异的电活性物质，通过电阻抗测量法对待测样品中微生物的含量和类别进行鉴定的一种技术该技术适用性强，可用于不同种类的、污染菌来源不明确的产品检测，已广泛应用于食品药品安全检测中。该方法体系的建立有助于提高生产企业的技术水平，同时也减少了检验机构的检测时间，提升检验机构的检测能力。但该技术也有一定的局限性，主要是无法鉴别出待测样品中污染微生物的来源，若培养基中有污染菌则会影响鉴定结果，并且该方法与传统培养方法有出入，在一定程度上限制了该技术的发展。根据其技术原理，电阻抗技术可分为直接阻抗测量法和间接阻抗测量法，二者的区别在于间接阻抗法是通过检测电极周围的KOH溶液中微生物代谢的CO2引发的阻抗变化来反映微生物活性水平，而非直接检测培养基中微生物代谢分解营养物质引发的阻抗变化。间接阻抗法是直接阻抗法的补充，多用于记录直接阻抗法难以记录数据的研究，如含有产气芽殖微生物以及霉菌和酵母菌群等的酸性类食品药品中。已有研究运用电阻抗法检测罐藏食品商业无菌，显示用直接阻抗法检测低酸性产品，间接阻抗法检测酸性产品建立的快速检测方法体系比常规检测法缩短了7天的检测时间，仅用3天便可得到所有的数据结果，并且该方法操作简便，作业人员效率高。

　　免疫学技术是指利用免疫反应的特异性原理，建立各种检测与分析技术，主要有免疫荧光技术、免疫层析技术、酶联免疫吸附技术和免疫磁珠技术等。

　　免疫荧光技术又称免疫抗体技术，其工作机制是抗原和抗体的特异性结合。利用萤火虫发光作用原理，将抗体与萤光素酶相结合，可对待测样品中的抗原进行示踪，即ATP荧光法快速检测技术。该技术目前已被国内外研究人员广泛应用于微生物菌落总数的测定，根据荧光信号来判定微生物含量，该技术成本低廉、反应快、操作简便。免疫层析技术则是运用层析技术先将抗体固定在硝酸纤维素膜上，当加入待测样液时再利用抗原抗体特异性识别原理，发生特异性抗原抗体反应，产生的复合物通过显色反应来判断是否存在目标微生物。该技术可在10min~15 min之内检测出结果，时效性高，操作简便，适用于普通人群的自测。酶联免疫吸附技术利用以酶标记的特异抗体来指示抗原-抗体的结合，通过结合后的显色反应来检测样品中的微生物。该技术灵敏度高、特异性强，广泛应用于食源性致病菌检测。免疫磁珠技术是磁珠与单抗结合，可特异性识别待测样本中的抗原，形成的复合物在磁场下分离，可判断出待测样品中是否存在AG九游会官网微生物。该方法操作简便，不易污染，是一种新的免疫技术。

　　纸片法在微生物试验的操作和培养条件上与常规方法一致，但省去了培养基配制过程，并且培养时间大幅缩短，因此得到了研究人员尤其是食品工程方面的广泛关注。李俊霞等[4]以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌为研究对象，分别用纸片法和国标法测定菌落总数并加以分析，结果显示二者无明显差异，纸片法可缩短检测流程及时间，提高工作效率，可以作为替代方法用于食品中菌落总数的检测。李宇等[5]对食品中细菌菌落总数、沉降菌及环境菌落总数进行测定，结果表明纸片法与传统检测法无差异，并且在灵敏度和准确性方面有更好表现。

　　该系统集成能够快速、准确地检测和鉴定细菌，是目前最先进的荧光培养检测系统之一。培养仪用于自动化培养和鉴定，特定成分的培养基提供营养物质，与待测样品一起放于培养瓶中，微生物生长过程中的代谢产物CO2激活培养瓶内荧光物质而发出特定波长荧光，其荧光变化反映瓶内微生物水平，判断是否有微生物生长。该系统具有准确可靠、自动化操作及信息化数据管理等特点，其检测时间与常规微生物检验法相比更短，检测效率更高，在食品药品检测领域应用广泛。杨燕等[6]利用BACTEC FX全自动系统对部分无菌制剂的无菌进行快速检查，并在方法的专属性、检测限、重复性及耐用性方面与药典法进行比较发现，BACTEC FX全自动系统用于药品无菌检查具有快速、灵敏度高的优势，有望为常规无菌检查法带来有效的补充。

　　光谱检测技术具有快速、灵敏、无损检测等特点，近期引起了国内外学者的广泛关注。尤其是表面增强拉曼光谱可对食源性致病微生物无标记快速识别，对其进行的大量深入研究可逐步提升对食源性致病微生物的快速鉴别能力，为相关监管检验机构的日常监管、质量控制等方面提供了新思路和途径。

　　MTT法原理是外源性MTT（噻唑蓝）可在微生物线粒体中琥珀酸脱氢酶的作用下还原成蓝紫色结晶甲臜，该物质具有不溶性，会沉积在细胞中，但该反应仅限于活体微生物。用酶联免疫检测仪测定吸光度可反映出活菌细胞数量。该方法可用于检测待测样品中的活体微生物。

　　快速检测技术具备快速、可靠的特性，利用各种新型仪器和精准的分析方法，在短时间内检测鉴定出样品中的微生物。如分子生物学技术可从DNA层面快速鉴定微生物菌种及分类，并能进一步分析其来源，可有效助力监管；另外，BACTEC TM FX系统可缩短检测时间，提高生产企业过程及质量控制能力。

　　快速检测技术在突发疫情的监管和检验方面也有重要作用。在全球化病毒更迭不断的背景下，如何能够在紧急状态下快速、准确检测显得尤为重要，同时对于普通群体来说，用于突发状况下的自测产品也要易于操作。该方法对应急检验的意义重大，可争取更多宝贵时间，更好地保障人民的生命安全。

　　药品生产企业及机构洁净实验室等的传统微生物检测法时限长，操作复杂，而快速检测技术可提供快速、简便的方法，为实验室认证提供新手段，可以在短时间内获得准确的检测结果，未来对该技术的研究可提高认证的效率和质量，从而在过程控制及源头上保障药品的质量安全。

　　当前医药行业飞速发展，人们对自身健康关注日益密切，药品质量安全关乎人类生命，因此研究微生物快速检测技术意义非凡。本文介绍了当前应用广泛的快速检测技术，阐述并分析了其检测方法及研究现状，同时讨论了其在药品监管方面的应用，以期切实保障药品安全，推动药品行业的高质量发展。

　　[1] 刘国石.基于新时代背景对我国食品药品安全监管的思考[J].产业与科技论坛，2023，22（24）：33-36.

　　[2] 王晓冲，周继昌，李军，等.实时荧光定量PCR方法应用于药品无菌快速检测的研究[J]. 中国现代应用药学，2013，30（12）：1333-1337.

　　[4] 李俊霞，周浩，朱文斌，等.3M菌落总数测试片的验收方法研究[J].实验室检测，2023，1（1）：30-34.

　　[5] 李宇，姚卢悦.菌落总数检测纸片法与国标方法的比较研究[J].食品工业，2012，33（10）：157-159.

　　[6] 杨燕，冯震，秦峰，等.BACTEC FX全自动系统用于药品无菌快速检查的评价研究[J]. 药物分析杂志，2021，41（11）：2017-2023.

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